ترادیسیدن فاکتور رشد بیماری فروکاهی دگزامتازون القا شده بیان ژن تترانکتین در زمان کانی سازی آزمایشگاهی SV-HFO رده سلولی استخوان ساز انسانی Transforming growth factor-ill downregulates dexamethasone-induced tetranectin gene expression during the in vitro mineralization of the human osteoblastic cell line SV-HFO
- نوع فایل : کتاب
- زبان : فارسی
- ناشر : الزویر Elsevier
- چاپ و سال / کشور: $1995
توضیحات
رشته های مرتبط: پزشکی و زیست شناسی، ژنتیک، علوم سلولی و مولکولی، آسیب شناسی پزشکی و ژنتیک پزشکی
۱٫مقدمه فاکتور تغییر رشد B1، یک عامل چند کاره است که بر الگوی تکثیر، تمایز و بیان ژن از چندین سلول، از جمله استوبلاست تاثیر می گذارد.استخوان منبع فراوانی از TGFofll [1،۲]است و مطالعات در آزمایشگاه نشان داده است که TGF-fll یک تنظیم کننده معمول در تشکیل استخوان است. در سیستم های کشت سلولی استئوبلاست، TGF-fll روند فرایند کانی سازی و بیان مارکر های استئوبلاستیک را شامل می شود، از جمله آلکالن فسفاتاز، c ~ 1 (I) پروکولاژن، استئوتونپین، استئونکتین و استئوکالسین [۲۲-۲۲]. اخیرا یک سلول استوبلاستیک انسان، SV-HFO،را بوسیله فنا ناپذیر کردن سلول معمولی جنین انسانی با ویروس ۴۰ سایمن (SV-40) تولید کرده ایم.این سلول ها ویژگی های مورفولوژیکی و فراصوتی مشخصه های استئوبلاست ها را داشتند و سطوح پایین نشانگرهای استئوبلاستیک مانند آلکالن فسفاتاز و استئوکالسین را تولید کردند.سلول های SVH FO استئوبلاستیک به عوامل استئوتروپیک ۱-، ۲۵-دی هیدروکسوییتامین D3، اسید رتینوئیک و TGF-flj پاسخ دادند [۲۴].اثر مستقیم TGF-fll روی سلولهای SV-HFO شامل کاهش مقدار قلیایی فسفاتاز و استئوکالسین بود [۲۴]. اخیراًبیان کردیم که سلولها تحت درمان با گلوکوکورتیکوئیدها قرار می گیرند [۲۵].در مطالعه اخیر، این استوبلاستیک های انسانی را در سیستم مدل آزمایشگاهی ، برای شروع تجزیه و تحلیل تنظیم بیان ژن تترانکتین، در طول معدنی سازی، به کار بردیم. تترانکتین پروتئینی است که از پلاسما به دست آمده است که در استخوان در یک زمان و فضای هماهنگ با کانی سازی در محیط آزمایشگاهی و در بدن انسان کشف شده است. گزارش کردیم که درمان دگزامتازون با بیان تترانتکین و ار ان ای، القا شده است و TGF-fl~ مانع از معدن سازی و تلقین تترانکتین آر ان ای شده است. ۲٫مواد و روش ها ۲٫۱٫ کشت سلول سلول های انسانی SV-HFO استئوبلاستی ایجاد شده، کلون شده و نگهداری شده است .همانطور که قبلا در ۳۷ درجه سانتیگراد در یک رطوبت هوا ۹۵٪ هوا و ۵٪ CO2 [23] توصیف شده است. سلول ها در قطعه ۱۴ در تراکم سلولی ۱ x 10 4 سلول / cm2 در ظروف کشت ۳۵ یا ۱۰۰ میلیمتر(Corning Glass Works، کورنینگ، نیویورک) در c-min-medium ضروری،(c ~ MEM؛ آزمایشگاه GIBCO، جزیره گرند، نیویورک) کاشته شده، و با ۱۰٪ سرم جنین گاوی (FBS، HR Bioscience، Lenexa، KS)، ۱۰ و mM fl-glycerophosphate (FL-GP؛ سیگما، سنت لوئیس، MO)، ۱۰۰ U / ml پنی سیلین و ۱۰۰ / Ig / ml استرپتومایسین (آزمایشگاه های زیستی ایمونولوژیک،Fujioka، ژاپن) و ۲۰ میلی مولار N-2-هیدروکسی اتیل پپپرازین-N’-اتان اسید سولفونیک (Hepes؛ سیگما) تکمیل شده اند. پس از ۶ روز کشت، سلول ها به همپیوندی رسیده و دگزامتازون (۱۰ -۶ M؛ Orgadrone، Sankyo، Tokyo، Japan) به این سلول ها به تنهایی یا همراه با TGF-fll (TGF-fl6 Sigma حاصل از پلاکت انسان) در غلظت های مختلف (۰٫۵ یا ۵ نانوگرم در میلی لیتر) اضافه می شود. کشت برای ۷ یا ۲۱ روز دیگر نگهداری می شود و سپس توسط von Kossa رنگ آمیزی وبرای اندازه گیری های مواد معدنی، کلسیم (کلسیم) و فسفات (P) مورد بررسی قرار میگیرد و برای جداسازی کل RNA مورد استفاده قرار میگیرد. محیط کشت کامل هر دو روز تجدید میشود.
۱٫مقدمه فاکتور تغییر رشد B1، یک عامل چند کاره است که بر الگوی تکثیر، تمایز و بیان ژن از چندین سلول، از جمله استوبلاست تاثیر می گذارد.استخوان منبع فراوانی از TGFofll [1،۲]است و مطالعات در آزمایشگاه نشان داده است که TGF-fll یک تنظیم کننده معمول در تشکیل استخوان است. در سیستم های کشت سلولی استئوبلاست، TGF-fll روند فرایند کانی سازی و بیان مارکر های استئوبلاستیک را شامل می شود، از جمله آلکالن فسفاتاز، c ~ 1 (I) پروکولاژن، استئوتونپین، استئونکتین و استئوکالسین [۲۲-۲۲]. اخیرا یک سلول استوبلاستیک انسان، SV-HFO،را بوسیله فنا ناپذیر کردن سلول معمولی جنین انسانی با ویروس ۴۰ سایمن (SV-40) تولید کرده ایم.این سلول ها ویژگی های مورفولوژیکی و فراصوتی مشخصه های استئوبلاست ها را داشتند و سطوح پایین نشانگرهای استئوبلاستیک مانند آلکالن فسفاتاز و استئوکالسین را تولید کردند.سلول های SVH FO استئوبلاستیک به عوامل استئوتروپیک ۱-، ۲۵-دی هیدروکسوییتامین D3، اسید رتینوئیک و TGF-flj پاسخ دادند [۲۴].اثر مستقیم TGF-fll روی سلولهای SV-HFO شامل کاهش مقدار قلیایی فسفاتاز و استئوکالسین بود [۲۴]. اخیراًبیان کردیم که سلولها تحت درمان با گلوکوکورتیکوئیدها قرار می گیرند [۲۵].در مطالعه اخیر، این استوبلاستیک های انسانی را در سیستم مدل آزمایشگاهی ، برای شروع تجزیه و تحلیل تنظیم بیان ژن تترانکتین، در طول معدنی سازی، به کار بردیم. تترانکتین پروتئینی است که از پلاسما به دست آمده است که در استخوان در یک زمان و فضای هماهنگ با کانی سازی در محیط آزمایشگاهی و در بدن انسان کشف شده است. گزارش کردیم که درمان دگزامتازون با بیان تترانتکین و ار ان ای، القا شده است و TGF-fl~ مانع از معدن سازی و تلقین تترانکتین آر ان ای شده است. ۲٫مواد و روش ها ۲٫۱٫ کشت سلول سلول های انسانی SV-HFO استئوبلاستی ایجاد شده، کلون شده و نگهداری شده است .همانطور که قبلا در ۳۷ درجه سانتیگراد در یک رطوبت هوا ۹۵٪ هوا و ۵٪ CO2 [23] توصیف شده است. سلول ها در قطعه ۱۴ در تراکم سلولی ۱ x 10 4 سلول / cm2 در ظروف کشت ۳۵ یا ۱۰۰ میلیمتر(Corning Glass Works، کورنینگ، نیویورک) در c-min-medium ضروری،(c ~ MEM؛ آزمایشگاه GIBCO، جزیره گرند، نیویورک) کاشته شده، و با ۱۰٪ سرم جنین گاوی (FBS، HR Bioscience، Lenexa، KS)، ۱۰ و mM fl-glycerophosphate (FL-GP؛ سیگما، سنت لوئیس، MO)، ۱۰۰ U / ml پنی سیلین و ۱۰۰ / Ig / ml استرپتومایسین (آزمایشگاه های زیستی ایمونولوژیک،Fujioka، ژاپن) و ۲۰ میلی مولار N-2-هیدروکسی اتیل پپپرازین-N’-اتان اسید سولفونیک (Hepes؛ سیگما) تکمیل شده اند. پس از ۶ روز کشت، سلول ها به همپیوندی رسیده و دگزامتازون (۱۰ -۶ M؛ Orgadrone، Sankyo، Tokyo، Japan) به این سلول ها به تنهایی یا همراه با TGF-fll (TGF-fl6 Sigma حاصل از پلاکت انسان) در غلظت های مختلف (۰٫۵ یا ۵ نانوگرم در میلی لیتر) اضافه می شود. کشت برای ۷ یا ۲۱ روز دیگر نگهداری می شود و سپس توسط von Kossa رنگ آمیزی وبرای اندازه گیری های مواد معدنی، کلسیم (کلسیم) و فسفات (P) مورد بررسی قرار میگیرد و برای جداسازی کل RNA مورد استفاده قرار میگیرد. محیط کشت کامل هر دو روز تجدید میشود.
Description
Transforming growth factor fll (TGF-flj) is a multifunctional compound that affects the proliferation, differentiation and gene expression pattern of several cell types, including osteoblasts [1-3]. Bone is an abundant source of TGFofll [1,2] and in vivo studies have shown that TGF-fll is a local regulator of bone formation. In osteoblast cell culture systems, TGF-fll regulates the mineralization process and the expression of osteoblastic markers, including alkaline phosphatase, c~1 (I) procollagen, osteopontin, osteonectin and osteocalcin [4-22]. We have recently established a human osteoblastic cell line, SV-HFO, by immortalizing normal human fetal calvaria osteoblasts with simian virus 40 (SV-40) [23]. The cells had morphological and ultrastructural features characteristic of osteoblasts and produced low levels of osteoblastic markers like alkaline phosphatase and osteocalcin. The osteoblastic SVHFO cells responded to osteotropic factors 1 ~,25-dihydroxyvitamin D3, retinoic acid and TGF-flj [24]. The direct effect of TGF-fll on SV-HFO cells included a reduction of the amount of both alkaline phosphatase and osteocalcin [24]. More recently, we have shown that the cells undergo mineralization upon treatment with glucocorticoids [25]. In the present study, we used this human osteoblastic in vitro model system to begin analysing the regulation of tetranectin gene expression during mineralization. Tetranectin is a protein originally isolated from plasma [26] that was found to be expressed in bone at a time and space coincident with mineralization in vivo and in vitro [27]. We report that dexamethasone treatment induced the expression of tetranectin mRNA and that TGF-fl~ inhibited mineralization and the induction of tetranectin mRNA.
