مهار کننده ژنستینه جریان سریع Na+ در سلولهای لیومیوسارکوم رحم، مستقل از مهار تیروزین کیناز است Genistein inhibition of fast Na + current in uterine leiomyosarcoma cells is independent of tyrosine kinase inhibition
- نوع فایل : کتاب
- زبان : فارسی
- ناشر : الزویر Elsevier
- چاپ و سال / کشور: $1996
توضیحات
رشته های مرتبط: زیست شناسی، بیوشیمی و علوم سلولی و مولکولی
کانال های سریع Na + وابسته به ولتاژ ممکن است نقش کلیدی در تحریک پذیری و انتشار عضله صاف رحم در طول کار داشته باشند [۱]. پروتئین فسفوریلاسیون (در گروه های سریین و / یا ترئونین) فرایند نظارتی عمده برای تلفیق کانال های یونی مانند کانال های Ca2 + L در سلول های عصبی، سلول های قلب و سلول های عضله صاف است [۲،۳].در سلولهای عضلانی صاف، cAMP و cGMP (و پروتئین کیناز مربوطه) ،جریان L2 Ca2 + (/ Ca (L) را تلفیق نمیکند) [۱]، در حالی که پروتئین کیناز C (PKC)] مورد ، / Ca (L) [4 راافزایش میدهد.همچنین برخی گزارش ها در مورد تلفیق کانال های سریع Na + توسط cAMP [5] یا PKC [6] وجود دارد.با این حال، در سلول های myometri، cAMP، cGMP، و PKC به نظر نمی رسد ،جریان سریع Na + در (۱Na(f)) را تلفیق کند.برای بررسی تلفیق احتمالی کانال های Na + توسط پروتئین کیناز اختصاصی تیروزیین در سلول های رحم، ما اثر ژنستئین، مهار کننده پروتئین کیناز تیروزین (TPK) را بررسی کردیم. نشان داده شده است که تروستین کیناز با انتقال سیگنال برای عوامل رشد مختلف مانند فاکتور رشد اپیدرمال (EGF)، فاکتور رشد فیبروبلاست (FGF) [8]، فاکتور رشد پلاکتی (PDGF) 9)در ارتباط است.برای انسولین [۱۰]. در سلول های عصبی، این عوامل رشد منجر به بیان کانال های Na + سریع در نورون های پایه ی [۱۱]، FGF جهت افزایش / Ca (L) [12،۱۳] میباشد.گزارش شده است که مهار کننده های TPK مانند ژنستئین جریان Ca2 را در سلول های عضلانی عروقی برای فعال کردن یک کانال کاتیونی غیر انتخابی [۱۵]متوقف می کنند [۱۴] و با این حال، هیچ گزارشی درمورد تنظیم جریان سریع Na + (INa (f)) توسط TPK منتشر نشده است. در این مطالعه، ما تلفیق احتمالی کانال های سریع Na+ را با استفاده از TPK در سلولهای لیومیوسارکومای رحم انسان و با مطالعه ی اثر مهارکننده های TPK با استفاده از انبرک جداکننده سلولی مورد بررسی قرار دادیم.سلول (SK-UT-1B)، که از رحم انسان استخراج شده است برای این مطالعه مورد استفاده قرار گرفته است چون این مدل خوبی برای سلول های عضلانی رحم موش های صحرایی باردار است.نشان داده شد که سلول های میوموتریال موش در طول بارداری دیررس، کانال های سریع + Na + را دریافت می کنند که ممکن است در کار طبیعی نقش مهمی ایفا کنند [۱۶،۱۷].ما دریافتیم که سلول لیومیوسارکوم نیز INa (f) را تحت کنترل یک یا چند عامل در سرم قرار می دهند.علاوه بر این، INa (f) تقریبا ۱۰ برابر بیشتر در تراکم در سلول لیومیوسارکوم، در مقایسه با سلول میوموتریال موش صحرایی باردارقرار دارد.ما دریافتیم که INa (f) توسط هر دو مهار کننده TPK، ژنیستئین و آنالوگ غیر فعال آن،یعنی daidzein، مهار می شود.بنابراین، فعالیت TPK درونی ممکن است در تنظیم فعالیت کانال Naé در سلول های میوموتریال دخالت نداشته باشد.
کانال های سریع Na + وابسته به ولتاژ ممکن است نقش کلیدی در تحریک پذیری و انتشار عضله صاف رحم در طول کار داشته باشند [۱]. پروتئین فسفوریلاسیون (در گروه های سریین و / یا ترئونین) فرایند نظارتی عمده برای تلفیق کانال های یونی مانند کانال های Ca2 + L در سلول های عصبی، سلول های قلب و سلول های عضله صاف است [۲،۳].در سلولهای عضلانی صاف، cAMP و cGMP (و پروتئین کیناز مربوطه) ،جریان L2 Ca2 + (/ Ca (L) را تلفیق نمیکند) [۱]، در حالی که پروتئین کیناز C (PKC)] مورد ، / Ca (L) [4 راافزایش میدهد.همچنین برخی گزارش ها در مورد تلفیق کانال های سریع Na + توسط cAMP [5] یا PKC [6] وجود دارد.با این حال، در سلول های myometri، cAMP، cGMP، و PKC به نظر نمی رسد ،جریان سریع Na + در (۱Na(f)) را تلفیق کند.برای بررسی تلفیق احتمالی کانال های Na + توسط پروتئین کیناز اختصاصی تیروزیین در سلول های رحم، ما اثر ژنستئین، مهار کننده پروتئین کیناز تیروزین (TPK) را بررسی کردیم. نشان داده شده است که تروستین کیناز با انتقال سیگنال برای عوامل رشد مختلف مانند فاکتور رشد اپیدرمال (EGF)، فاکتور رشد فیبروبلاست (FGF) [8]، فاکتور رشد پلاکتی (PDGF) 9)در ارتباط است.برای انسولین [۱۰]. در سلول های عصبی، این عوامل رشد منجر به بیان کانال های Na + سریع در نورون های پایه ی [۱۱]، FGF جهت افزایش / Ca (L) [12،۱۳] میباشد.گزارش شده است که مهار کننده های TPK مانند ژنستئین جریان Ca2 را در سلول های عضلانی عروقی برای فعال کردن یک کانال کاتیونی غیر انتخابی [۱۵]متوقف می کنند [۱۴] و با این حال، هیچ گزارشی درمورد تنظیم جریان سریع Na + (INa (f)) توسط TPK منتشر نشده است. در این مطالعه، ما تلفیق احتمالی کانال های سریع Na+ را با استفاده از TPK در سلولهای لیومیوسارکومای رحم انسان و با مطالعه ی اثر مهارکننده های TPK با استفاده از انبرک جداکننده سلولی مورد بررسی قرار دادیم.سلول (SK-UT-1B)، که از رحم انسان استخراج شده است برای این مطالعه مورد استفاده قرار گرفته است چون این مدل خوبی برای سلول های عضلانی رحم موش های صحرایی باردار است.نشان داده شد که سلول های میوموتریال موش در طول بارداری دیررس، کانال های سریع + Na + را دریافت می کنند که ممکن است در کار طبیعی نقش مهمی ایفا کنند [۱۶،۱۷].ما دریافتیم که سلول لیومیوسارکوم نیز INa (f) را تحت کنترل یک یا چند عامل در سرم قرار می دهند.علاوه بر این، INa (f) تقریبا ۱۰ برابر بیشتر در تراکم در سلول لیومیوسارکوم، در مقایسه با سلول میوموتریال موش صحرایی باردارقرار دارد.ما دریافتیم که INa (f) توسط هر دو مهار کننده TPK، ژنیستئین و آنالوگ غیر فعال آن،یعنی daidzein، مهار می شود.بنابراین، فعالیت TPK درونی ممکن است در تنظیم فعالیت کانال Naé در سلول های میوموتریال دخالت نداشته باشد.
Description
The human leiomyosarcoma cell line (SK-UT-1B) was obtained from American Type Culture Collection (Rockville, MD). The cells were kept frozen in small aliquots at -80°C. To start cell growth, some aliquots were transferred to culture flasks (25 cm 2 bottom), and the cells were grown in Dulbecco’s modified Eagle’s medium (DMEM) supplemented with 5% fetal bovine serum (FBS) (JRH Bioscience, Lenexa, KS), 100 U/ml penicillin G, and 100 /xg/ml streptomycin (Gibco Laboratories, Grand Island, NY). The cell cultures were maintained at 37°C in a humidified atmosphere of 5% CO 2 and 95% air, and grown until confluency. The cells were passaged every two weeks. For passage, confluent monolayers were dissociated from the flasks using phosphate-buffered saline containing the proteolytic enzyme, dispase (0.5 mg/ml) (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN). The culture medium was changed every 2-3 days for cell ‘feeding’. For patch-clamp experiments, cells were plated on coverslips and incubated in medium for 24-72 h.
